Blog

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE ESCOLA DE QUНMICA E ALIMENTOS CURSO DE ENGENHARIA QUIMICA DISCIPLINA DE BIOQUНMICA INDUSTRIAL LABORATУRIO DE ENGENHARIA DE BIOPROCESSOS PROFESSOR: ANDRЙ BURKERT Determinaзгo de Coliformes Termotolerantes e Coliformes Totais Andressa Silva Leonardo Costa 6 Coliformes Fecais — 40754 37227 OF17 Melissa de la Rocha 4 5 p 42758 Rio Grande, outubro Sumбrio 1. 3. 1. 1 3. 1 . 2 3. 1 . 3 3. 2 abrina Farias 42754 3 2. Objetivo.. Revisгo Bibliogrбfica .. 5 3. 1 Organismos indicadores „ . 5 Coliformes 6 Estreptococos Fecais 3. . 1 3. 2. 2 3. 3 Exame de Laboratуrio . 8 Tйcnicas Bacteriolуgicas . . . 8 Provas da presenзa de bactйrias coliformes — 9 3. 3. 1 3. 3. 2 3. 3. 3 Determinaзгo do nъmero mais provбvel de coliformes totais e fecais – Tйcnica da Fermentaзгo em Tubos Mъltiplos 13 4. Materiais e Mйtodos………… … 17 4. 1 4. 2 Materiais — • 17 Mйtodos . 17 Teste Presuntivo 17 Contagem de coliformes fecais . 4. 2. 1 4. 2. 2 5. Resultado e Discusгo……. — 18 6. Conclusгo… Perguntas. …. ….. … 20F Perguntas….. . .. 21 8.

Referкncias Bibliograficas… 24 1. Introduзгo A preservaзгo da qualidade da бgua й uma necessidade niversal, que exige atenзгo por parte das autoridades sanitбrias e consumidores em geral, particularmente no que se refere а бgua dos mananciais como poзos, minas, nascentes, lagos, entre outros, destinados ao consumo humano, visto que sua contaminaзгo por excretas de origem humana e animal pode tornб-las um veiculo de transmissгo de agentes de doenзas infecciosas e parasitбrias, os quais influenciam diretamente ? saъde da populaзгo.

A avaliaзгo da qualidade microbiolуgica da бgua pode ser realizada atravйs da Identificaзгo de Indicadores de contaminaзгo fecal e indicadores biolуgicos, quando propriado, utilizando-se organismos elou comunidades aquбticas. A pesquisa de coliformes й baseada nas caracterнsticas do grupo bastonete que produzem бcidos e gбs a partir da lactose, fazendo com que seja identificada ou nгo a presenзa de coliformes, devido a presenзa de gбs no tubo de Duran apуs 24 horas na estufa bacteriolуgica б 350 C.

No presente trabalho foi utilizado como microrganismos indicadores, os coliformes totais e os coliformes termotolerantes (fecais). 2. Objetivo Determinar coliformes totais e termotolerantes utilizando a tйcnica de tubos mъltiplos e expressar os resultados em termos de NMP. . Revisгo Bibliografica As doenзas de origem hнdrica geralmente vem de organismos vivos e nгo de matйria orgвnica morta ou sais minerais dissolvidos, t dissolvidos, tais como sais de chumbo, zinco, nitratos, etc. Й universalmente conhecido que os excrementos dos homens e animais contкm bactйrias coliformes, em grande numero (100 a 1000 milhхes/g).

As bactйrias coliformes sгo Gram Negativas, em forma de bastгo nгo formadores de esporo, capazes de se desenvolverem em presenзa de sais de bile, fermentadoras da lactose com formaзгo de gбs, facilmente cultivбveis, quer aerуbica ou anaerуbica. Por sua habilidade em fermentar a lactose produzindo gбs e бcido, se distinguem de um grande grupo que incluem organismos patogкnicos, como bactйrias tifуides e paratifуides. As bactйrias patogкnicas nгo se multiplicam e nem se desenvolvem na бgua, eles se debilitam e tendem a morrer por terem perdido seu alimento e as condiзхes ideais de vida. or esta razгo й difнcil isolar e identificar diretamente qualquer organismo de doenзa presente na бgua de consumo, entгo se recorre a um mйtodo que permite identificar a presenзa de organismos pertencentes ao “Grupo Coliforme” de origem intestinal. Quando o grupo coliforme estб presente na бgua, ele й visto como uma indicaзгo de poluiзгo com esgoto e provбvel presenзa de bactйrias patogкnicas. Um curso d’бgua pode ser poluнdo com esgoto e nгo ter organismos patogкnicos, mas a presenзa de coliformes indica uma бgua potencialmente perigosa, que necessita de tratamento de desinfecзгo. . 1 Organismos indicadores A qualidade de uma бgua de abastecimento й avaliada usando organismos indicadores. A probabilidade de existкncia das doenзas na бgua passadas a ela por fezes de indivнduos doentes, se faz por contagem de icrorganismos nгo patogкnicos, produzidos em grande nъmero no intestino, sendo uma referкncia, ao invйs de uma contagem verdadeira de patуgenos, mais d 40F intestino, sendo uma referкncia, ao invйs de uma contagem verdadeira de patуgenos, mais difнceis de identificar.

Segue abaixo as principais razхes para o uso de organismos indicadores: 0 Aparecem em grande quantidade nas fezes humanas, bilhхes produzidos por dia/individuo, com grande probabilidade de serem encontrados na бgua; Sгo encontrados apenas nas fezes de animais de sangue quente ou homeotermos, classe que inclui o omem e todos os mam[feros.

Essa caracterнstica й importante, pois uma vez identificada a sua presenзa, pode-se afirmar que a бgua teve contato com excretas desses animais; C] Do ponto de vista da resistкncia аs condiзхes ambientais (temperatura e outros agentes desinfetantes), sгo muito semelhantes aos microrganismos patogкnicos intestinais. Tratase de uma caracterнstica importante, pois se fossem mais suscetнveis (sobrevivessem menos tempo que os patogкnicos), nгo poderiam ser identificados, isto й, nгo seriam indicadores.

Se fossem menos suscetнveis (sobrevivessem por mais tempo), poderia parecer em бguas jб livres dos patogкnicos; Sua identificaзгo, do ponto de vista laboratorial, requer tйcnicas simples e econфmicas, ao contrбrio daquelas necessбrias а identificaзгo dos microorganismos patogкnicos. Os organismos usados como referкncia pertencem a um grupo de bactйrias chamados Coliformes dividido em trкs sub-grupos: coliformes totais, coliformes fecais e estreptococos fecais. 3. 1. Coliformes Totais Reъne um grande nъmero de bactйrias, entre elas a Eschrichia coll, de origem exclusivamente fecal e que dificilmente se multiplica fora do trato intestinal. O problema й que outras bactйrias dos gкneros Citrobacter Eriterobacter e Klebsiella, igualmente identificadas p laboratoriais como c 7 Eriterobacter e Klebsiella, Igualmente identificadas pelas tйcnicas laboratoriais como coliformes totais, podem existir no solo e nos vegetais. Desta forma, nгo й possнvel afirmar categoricamente que uma amostra de бgua com resultado positivo para coliformes totais tenha entrado em contato com fezes.

Estas bactйrias sгo bacilos gram negativos, aerуbios ou anaerуbios facultativos, nгo formadores de esporos, capazes de crescer na presenзa de ais bilhares ou outros compostos com propriedades similares de inibiзгo de crescimento e, que fermentam a lactose com produзгo de gбs e бcido a 350C em 48 horas. 3. 1. 2 Coliformes Fecais Pertencem a esse subgrupo os microorganismos que aparecem exclusivamente no trato intestinal. Em laboratуrio, a diferenзa entre coliformes totais e fecais й feita atravйs da temperatura (os coliformes fecais continuam vivos mesmo a 440C, enquanto os coliformes totais tкm crescimento a 350C).

Sua identificaзгo na бgua permite afirmar que houve presenзa de matйria fecal, embora nгo exclusivamente humana. . 1. 3 Estreptococos Fecais Embora sua identificaзгo nгo seja rotina em laboratуrios de anбlise de бgua, trata-se de um subgrupo importante, jб que fazem parte dele as espйcies do gкnero Streptococcus spp. que ocorrem apenas no trato intestinal do homem e de animais de sangue quente, como os Coliformes Fecais. Existe uma correlaзгo entre a ocorrкncia de Coliformes Fecais e Estreptococos Fecais.

Normalmente empregada em cursos de бgua, consiste em quantificar o nъmero de microorganismos de cada um dos subgrupos e ma amostra. Se a relaзгo 6 OF contaminaзгo fecal predominantemente humana. Se essa relaзгo for menor que 1 a contaminaзгo fecal predominante serб de animais de sangue quente. Os resultados que se encontrarem entre esses dois valores nгo permitem inferir nada a respeito da origem da contaminaзгo fecal. 3. 2 Padrхes de Qualidade Dependendo da finalidade que a бgua terб, ela deverб apresentar uma qualidade m[nima prevista pela legislaзгo.

Dentre diversas medidas de qualidade da бgua temos a potabilidade e a balneabilidade, os quais medem a quantidade de coliformes na бgua. 3. 2. 1 Potabilidade ndica se a бgua analisada й potбvel, ou seja, prуpria para o onsumo humano, cujos parвmetros microbiolуgicos, fнsicos, quнmicos e radioativos atendam a um padrгo que nгo ofereзa riscos а saъde. A бgua potбvel deve estar em conformidade com o padrгo microbiolуgico, descrito pela vigilвncia sanitбria. 3. 2. 2 Balneabilldade Balneabilidade й a medida das condiзхes sanitбrias das бguas destinadas а recreaзгo de contato primбrio.

A balneabilidade й feita conforme a Resoluзгo CONAMA 274 de 29 de novembro de 2000, apуs 5 semanas de coletas e anбlises microbiolуgicas para Coliformes Fecais, Escherichia coli elou Enterococos, nos dias locais de maior afluкncia do pъblico. Quando da utilizaзгo de mais de um indicador biolуgico as бguas terгo as suas condiзхes avaliadas de acordo com o critйrio mais restritivo. Ressalta-se que os padrхes referentes aos influenciam negativamente na qualidade das бguas, pois incrementam o lanзamento direto ou indireto de esgotos.

A partir dos resultados das anбlises de Coliformes Fecais das 5 semanas consecutivas, sгo emitidos resultados na forma de boletins semanais. O boletim informa a qualidade das бguas quanto ? balneabilidade, que pode ser enquadrada nas categorias “prуpria” u “imprуpria” para recreaзгo de contato primбrio. A categoria prуpria pode ser subdividida em classes: excelente, muito boa e satisfatуria. Essas classificaзхes estгo relacionadas com a quantidade de coliformes presentes na бgua. 3. 3 Exame de Laboratуrio 3. 3. Tйcnicas Bacteriolуgicas Os mйtodos de exame bacteriolуgico da бgua sгo apresentados no livro Standard Methodos for the Examination of Water and Wastewater, preparado e publicado, conjuntamente, pelas associaзхes Americam public Health Association, Americam Water Works associatiom e Federation of Sewage and Industrial wastes Associations. Tal como se indica no tнtulo, os mйtodos sгo padronizados e os detalhes tйcnicos devem ser rigorosamente seguidos, a fim de haver significaзгo oficial nos resultados obtidos.

Torna-se indispensбvel seguir, com atenзгo, os seguinte detalhes, quando amostras de бgua forem submetidas а anбlise bacteriolуgica: 1- A amostra deve ser colhida em recipiente estйril; 2- A amostra deve ser representativa do universo do qual foi colhida; 3- Deve-se evitar a contaminaзгo da amostra durante e apуs a coleta; 4- A amostra deve ser examinada logo apуs sua obtenзгo; 5- havendo a necessidade de uma demora a realizaзгo da anбlise, A amostra deve ser guardada a uma temperatura entre O e 100C.

Os processos bacteriolуgicos rotineiros consistem em uma conta em em placa para determinaзгo do nъmero 80F bacteriolуgicos rotineiros consistem em uma contagem em placa para determinaзгo do nъmero de bactйrias presentes na amostra e em provas que revelam a existкncia de bactйrias do grupo coliforme. 3. 3. 1 . 1 Determinaзгo do nъmero total de bactйrias por mililitro de бgua Cada colфnia desenvolvida se considera como representando uma ъnica bactйria existente na amostra de бgua tilizada.

Os resultados obtidos nгo podem ser considerados absolutamente certos, porque a amostra representa uma fraзгo muito pequena da бgua cuja qualidade estб sendo investigada. Se a amostra for diluнda a imprecisгo serб maior, pois as bactйrias nгo se distribuem uniformemente na бgua e duas porзхes de бgua igualmente diluнdas podem apresentar conteъdo total muito diferente. 3. 3. 1. 2 Determinaзгo da presenзa ou ausкncia do grupo coliforme Й o mais importante, nгo й permitido isolar, identificar ou enumerar as bactйrias patogкnicas existentes na бgua.

Esse йtodo apenas indica o grau de contaminaзгo das бguas, com despejo de origem humana ou animal. Qualquer possibilidade na presenзa do grupo coliforme indica que a бgua nгo й satisfatуria e nem de qualidade sanitбria segura. 3. 3. 2 Provas da presenзa de bactйrias coliformes Diversos tipos de meios seletivos e diferencias aceleram o processo de exame das бguas para comprovar a presenзa de organismos coliformes. O exame compreende trкs etapas sucessivas: o teste presuntivo, o teste de confirmaзгo e o teste completo. 3. 3. 2. 1 Teste Presuntivo Consiste na semeadura em Caldo

Lauryl Sulfato Triptose ( e enriquecimento de 7 no melo de cultura empregado nesse ensaio й prova presuntiva para a presenзa de bactйrias do grupo coliforme. O teste й dito presuntivo porque outras bactйrias nгo pertencentes ao grupo coliforme podem fermentar a lactose e produzir gбs. 3. 3-2. 2 Teste de Confirmaзгo Verifica a veracidade do teste presuntivo, consiste em inocular uma fraзгo do caldo lactosado fermentado em um meio seletivo que sу permite o desenvolvimento do grupo coliforme, inibindo o crescimento das outras bactйrias fermentadoras da lactose.

Um dos meios ue pode ser utilizado й o Caldo Lactosado Verde Brilhante (VB), no qual a formaзгo de gбs serб a confirmaзгo da presenзa de coliformes totais. Um outro melo que й usado e o Бgar Eosina Azul de Metileno (EMB) no qual os germes do grupo coli- aerуgenes formam colфnias caracterнsticas. A Escherichia coli forma colфnias pequenas, escuras com centro quase negro, com um brilho metбlico esverdeado, jб a Enterobacter forma colфnias grandes mucуides e roseas, com o centro escuro, raramente demonstrando brilho metбlico. A presenзa de colфnias tнpicas confirma a ocorrкncia de coliformes fecais.

A Figura 1 mostra o mйtodo de inoculaзгo da amostra em placa de Petri com Бgar Eosina Azul de Metileno. Figura 1: Inoculaзгo de amostra em placa de Petri. Para a confirmaзгo de coliformes fecais pode ser utilizada tambйm a transferкncia de um inoculo de cada cultura com resultado positivo em LST para tubos contendo Caldo EC. A produзгo de gбs й prova confirmativa para Coliformes Fecais. A Figura 2 mostra o procedimento para realizaзгo do teste presuntivo e o teste confirmativo. Figura 2: Procedimento para realizaзгo dos testes presuntivo e confirmativo. 0 DF