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SUMÁRIO • • • • • • Introdução e Constituição Técnica Aplicações Vantagens e Desvantagens Conclusão Bibliografia INTRODUÇÃO E CONSTITUIÇÃO • DNA Chips ou DNA mlcroarrays são um arranjo pré-definido de sequências de DNA, inseridas em spots, quimicamente ligadas a uma superfície sólida. • A superfície sólida é constituída por lâminas de vidro revestidas com compostos que conferem carga positiva ou membranas de nylon positivamente carregadas. ?? Utilizados na detecç- (mRNA na forma de c ar idos nucleicos mostras biológicas, as quais irão sofrer h ‘•:A ado no chip. o view TÉCNICA • Esta tecnologia permite ao investigador determinar quais os genes expressos por uma célula ou tecido. • As moléculas de EDNA são obtidas a partir das moléculas de mRNA isoladas da amostra em estudo, com a acção da enzima transcriptase reversa na presença de nucleótidos aminoacil. ?? A detecção é possível pois as sequências de cDNA são marcadas nas lâminas de vidro com fluorocromos cianina 3 (Cy3) e cianina 5 (Cy5), ou com o isótopo 33-P, quando os chips são preparados em membranas de nylon. • Segue-se a hibridação, onde se deve ter em atenção alguns arâmetros: – temperatura – tempo de hibridação – concentração de sais – pH da solução -presença ou ausência de agentes desnaturantes (p. e. ormaldeído) • As sequencias-alvo marcadas, que se ligaram a uma sequência do DNA Chip, geram um sinal. • O sinal gerado depende da eficiência da hibridação, determinada pelo número de bases emparelhadas, pelas condicões da hibridação e pela lavagem após a hibridação. • O sinal é obtido por meio de leitores (scanners), a laser para os fluorocromos ou leitores de fósforo para o isótopo 33-P, que medem a intensidade do sinal de cada spot. APLICAÇÕES C] Identificação de genes num tecido ou célula.

Cl Determinação do nível de expressão dos genes de uma amostra. C] Comparação da transcrição genética entre dois ou mais tipos de células diferentes. Comparação da expressão genética entre células de um tecido cancerígeno e um tecido normal • O cDNA proveniente do tecido normal é marcado com Cy3 (verde) • O cDNA proveniente do tecido cancerígeno é marcado com Cy5 (vermelho) • As duas sequências de cDNAs são misturadas e sofrem ou não hibridação ao serem aplicadas num chip de DNA. ?? Submete-se o chip a um scanner para visualizar a fluorescência os dois fluorocromos, após excitação com um feixe de laser de um comprimento de onda definido. • Obtem-se uma imagem dos spots do DNA chip, a partir da qual é possível determinar quais os genes presentes nos tecidos. • Cada spot corresponde a um gene específico.

SPOT ausência de expressão do PAGF9ÜF3 bos os tecidos (não (não ocorre hibridação do tecido cancerígeno) aumento da expressão genética no tecido cancerígeno em estudo (apenas ocorre hibridação do tecido cancerígeno) a expressão genética ocorre de igual forma em ambos os tecidos (ambos os ecidos sofrem hibridação na mesma proporção) VANTAGENS E DESVANTAGENS C] Especificidade C] Rápido C] Permite a análise de vários tecidos em simultâneo X Ocorrência de splicing alternativo durante o processo de transcrição X Limitação da detectabilidade dos mRNAs instáveis CONCLUSÃO • A tecnologia dos chips de DNA está largamente a ser utilizada por todo o mundo, substituindo outros métodos mais lentos e dispendiosos. ?? A experiência anteriormente relatada, é actualmente muito utilizada no diagnóstico de cancro, como o da mama e da próstata. BIBLIOGRAFIA • Brewster, Jay L. t al, The Microarray Revolution — Perspectives fram educators, 2004 • http://bioinfo. cs. technion. ac. il/projects /Kahana-Navon/DNAchips. htm • http://boasaude. uol. com. br ReturnCatlD=1798#co de%20CDNA) • http://www. ebi. ac. uk/microarray/EmblTeaching- 1 21202. pdf • http://vww. sumanasinc. com/webcontent/animations/content /dna chips. html • http://www. bio. davidson. edu/courses /genomics/chip/chip. html • http://www. pharmaasia. com Icmsimages/paaug06pg1 7pic1 . jpg • http://www. dailygalaxy . comLa/6a00d8341 bf7f7S3ef0133ed876adc 970b-320wi • http://en. wikipedia. org/wik rray